牛(niu)乳(ru)含有豐(feng)富優質全價的(de)(de)(de)(de)(de)(de)營(ying)養成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen),是(shi)(shi)易(yi)消化(hua)吸收(shou)(shou)(shou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)天然食物。其(qi)(qi)中(zhong)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質含量為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)30～35g/L,大(da)約(yue)80%為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(26g/L),其(qi)(qi)余的(de)(de)(de)(de)(de)(de)20%為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)乳(ru)清蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(6g/L)。酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)是(shi)(shi)在(zai)20℃的(de)(de)(de)(de)(de)(de)條件(jian)下將(jiang)(jiang)脫脂乳(ru)用酸調節pH4.6時(shi)沉(chen)淀(dian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質。酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)主要成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)是(shi)(shi)αs1-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)、αs2-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)、β-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)、κ-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)。它們在(zai)結構和(he)性質上(shang)(shang)存在(zai)著(zhu)顯著(zhu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)差異且(qie)具有廣泛(fan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)用途,如(ru)用于開發(fa)嬰兒配(pei)方(fang)乳(ru),生(sheng)產酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)源(yuan)生(sheng)物活性肽,生(sheng)產出功能(neng)特性更強的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質,優化(hua)奶酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)和(he)奶酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)風味(wei)物質的(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)產過(guo)(guo)程(cheng)等。由于酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)級(ji)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)產物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)功能(neng)眾(zhong)多,其(qi)(qi)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)純(chun)(chun)化(hua)制備工作也是(shi)(shi)關注的(de)(de)(de)(de)(de)(de)焦點(dian),本文(wen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)就是(shi)(shi)以(yi)(yi)(yi)干(gan)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)原料(liao),研(yan)究酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)級(ji)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa),以(yi)(yi)(yi)期將(jiang)(jiang)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)主要成(cheng)(cheng)份αs-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)、β-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)和(he)κ-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)制取,使(shi)(shi)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)使(shi)(shi)用領域增大(da),實(shi)用性增強和(he)產品(pin)附(fu)(fu)加值(zhi)提高并有利(li)(li)于各種乳(ru)及(ji)乳(ru)制品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)深加工和(he)資(zi)源(yuan)利(li)(li)用。實(shi)驗(yan)主要由四個部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)組(zu)成(cheng)(cheng)。 第一部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen),以(yi)(yi)(yi)SinoChrom 300A C8柱為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)柱,建立了(le)(le)高效液(ye)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)色(se)譜法(fa)測(ce)定酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)組(zu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)。結果表明,干(gan)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)樣品(pin)用含2%巰基乙(yi)醇和(he)1%的(de)(de)(de)(de)(de)(de)檸檬(meng)酸鈉(na)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)7M的(de)(de)(de)(de)(de)(de)尿(niao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)溶液(ye)處(chu)理(li)后,以(yi)(yi)(yi)水(shui)(內(nei)(nei)含體積(ji)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)數(shu)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)0.1%TFA)和(he)乙(yi)腈(內(nei)(nei)含體積(ji)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)數(shu)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)0.1%TFA)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)流(liu)動(dong)A相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)B相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang),在(zai)梯度(du)洗(xi)脫流(liu)速(su)1. 0mL/min,檢(jian)測(ce)波長214nm條件(jian)下,酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)組(zu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)能(neng)被有效分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)且(qie)具有較(jiao)大(da)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)響應值(zhi),線性關系良好,峰面積(ji)和(he)保(bao)留(liu)時(shi)間具有良好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)穩定性,加樣回(hui)收(shou)(shou)(shou)率較(jiao)好,建立的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)切實(shi)可行。 第二(er)部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen),以(yi)(yi)(yi)Q-Sepharose Fast Flow為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)子(zi)交換(huan)(huan)介質,以(yi)(yi)(yi)干(gan)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)原料(liao),對(dui)(dui)(dui)其(qi)(qi)直接(jie)(jie)用于酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)組(zu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)進(jin)(jin)行了(le)(le)研(yan)究。首先確(que)定了(le)(le)其(qi)(qi)吸附(fu)(fu)pH,吸附(fu)(fu)容量,接(jie)(jie)著(zhu)討論了(le)(le)流(liu)速(su),洗(xi)脫程(cheng)序對(dui)(dui)(dui)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響,最(zui)終結果為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang):A相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)含4M尿(niao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)、0.5%ME,pH8.0的(de)(de)(de)(de)(de)(de)20mM的(de)(de)(de)(de)(de)(de)Tris-HCl緩沖液(ye),Β相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)含2M氯化(hua)鈉(na)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)A相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)溶液(ye),pH仍為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)8,洗(xi)脫流(liu)速(su)1ml/min,檢(jian)測(ce)波長280nm。以(yi)(yi)(yi)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)步洗(xi)脫為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)洗(xi)脫方(fang)式,該(gai)洗(xi)脫程(cheng)序能(neng)夠實(shi)現各酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)初(chu)步富集,并為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)進(jin)(jin)一步的(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)打下基礎(chu)。 第三部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen),研(yan)究了(le)(le)尿(niao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)沉(chen)淀(dian)法(fa)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)條件(jian),分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)了(le)(le)尿(niao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)濃度(du)、酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)濃度(du)、沉(chen)淀(dian)溫度(du)對(dui)(dui)(dui)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響。先進(jin)(jin)行單因(yin)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)試(shi)驗(yan),再在(zai)各單因(yin)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)最(zui)佳(jia)水(shui)平值(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)基礎(chu)上(shang)(shang),通過(guo)(guo)L9(34)正交實(shi)驗(yan)結果確(que)定了(le)(le)溫度(du)、酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)濃度(du)、尿(niao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)濃度(du)這幾個因(yin)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)佳(jia)水(shui)平值(zhi)組(zu)合得沉(chen)淀(dian)溫度(du)40℃,酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)濃度(du)6%,尿(niao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)濃度(du)3.2mol/L。然后將(jiang)(jiang)尿(niao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)沉(chen)淀(dian)法(fa)與離(li)(li)(li)(li)(li)(li)子(zi)交換(huan)(huan)層(ceng)(ceng)(ceng)析(xi)法(fa)接(jie)(jie)合對(dui)(dui)(dui)干(gan)酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)(su)進(jin)(jin)行分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)級(ji)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li),最(zui)終得κ-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)對(dui)(dui)(dui)純(chun)(chun)度(du)57.3%,回(hui)收(shou)(shou)(shou)率49.8%;αs-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)對(dui)(dui)(dui)純(chun)(chun)度(du)75.4%,回(hui)收(shou)(shou)(shou)率73.8%;β-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)對(dui)(dui)(dui)純(chun)(chun)度(du)87.9%,回(hui)收(shou)(shou)(shou)率62.0%。 第四部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen),以(yi)(yi)(yi)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)子(zi)交換(huan)(huan)層(ceng)(ceng)(ceng)析(xi)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)αs-酪(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)收(shou)(shou)(shou)集液(ye)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)例,利(li)(li)用交聯葡聚糖Sephadex G-25進(jin)(jin)行了(le)(le)凝膠過(guo)(guo)濾脫鹽(yan)操作,以(yi)(yi)(yi)含40mM碳(tan)酸氫氨的(de)(de)(de)(de)(de)(de)pH為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)8的(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶液(ye)為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang),從上(shang)(shang)樣體積(ji)和(he)洗(xi)脫流(liu)速(su)進(jin)(jin)行討論,得最(zui)佳(jia)上(shang)(shang)樣量為(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)3ml,最(zui)佳(jia)洗(xi)脫流(liu)速(su)4ml。該(gai)層(ceng)(ceng)(ceng)析(xi)過(guo)(guo)程(cheng)能(neng)有效的(de)(de)(de)(de)(de)(de)去處(chu)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)子(zi)交換(huan)(huan)層(ceng)(ceng)(ceng)析(xi)中(zhong)引入的(de)(de)(de)(de)(de)(de)鹽(yan)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen),且(qie)快(kuai)速(su)方(fang)便(bian),非常有利(li)(li)于提高分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)效率和(he)節約(yue)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)(li)時(shi)間。

作者：佚名　　來源：知網空間

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