酪(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)白(bai)巨肽(tai)(tai)(Casein Glycomacropeptide, CGMP)是(shi)一(yi)種由凝(ning)(ning)乳(ru)(ru)酶(mei)(或胃蛋(dan)白(bai)酶(mei))水解(jie)酪(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)白(bai)中K-casein的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Phe105-Met106的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)鍵(jian)得到的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)具(ju)有(you)64個氨基(ji)酸(suan)殘基(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)短肽(tai)(tai)。CGMP具(ju)有(you)多(duo)種生物活性。目前酪(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)白(bai)糖(tang)(tang)巨肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生產主(zhu)要(yao)是(shi)從乳(ru)(ru)清中提(ti)取,由于乳(ru)(ru)清中乳(ru)(ru)糖(tang)(tang)、乳(ru)(ru)清蛋(dan)白(bai)等(deng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)存(cun)在,使大規(gui)模(mo)生產CGMP存(cun)在一(yi)定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)技術(shu)困難。本文以(yi)(yi)干酪(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)為(wei)(wei)(wei)原料,從干酪(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶(rong)(rong)解(jie)、凝(ning)(ning)乳(ru)(ru)酶(mei)酶(mei)解(jie)條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)、CGMP的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)初(chu)提(ti)、精制(zhi)以(yi)(yi)及(ji)(ji)(ji)產品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)成(cheng)分(fen)(fen)測定等(deng)方面,研究(jiu)了(le)凝(ning)(ning)乳(ru)(ru)酶(mei)酶(mei)解(jie)干酪(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)制(zhi)備CGMP的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)工(gong)藝。 通過(guo)研究(jiu)氫氧(yang)(yang)化鈉濃度(du)(du)(du)(du),干酪(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)溶(rong)(rong)解(jie)量與(yu)(yu)CGMP得率的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)關(guan)(guan)系,得到最(zui)佳的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶(rong)(rong)解(jie)條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)為(wei)(wei)(wei)：氫氧(yang)(yang)化鈉濃度(du)(du)(du)(du)0.16mol/L,干酪(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶(rong)(rong)解(jie)量為(wei)(wei)(wei)6g/100mL。 結(jie)合(he)單因(yin)素(su)(su)實驗(yan)結(jie)果(guo)(guo),采(cai)用(yong)Minitab軟(ruan)件(jian)(jian)(jian)(jian)進行實驗(yan)設計,對影響酶(mei)解(jie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)主(zhu)要(yao)因(yin)素(su)(su)進行了(le)篩選,結(jie)果(guo)(guo)表(biao)明(ming)酶(mei)解(jie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)間、溫度(du)(du)(du)(du)、pH、酶(mei)與(yu)(yu)底物比(bi)是(shi)影響酶(mei)解(jie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)主(zhu)因(yin)素(su)(su)。根據Minitab的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)析(xi)結(jie)果(guo)(guo),采(cai)用(yong)Design Expert軟(ruan)件(jian)(jian)(jian)(jian)中響應面設計及(ji)(ji)(ji)分(fen)(fen)析(xi)對酶(mei)解(jie)主(zhu)因(yin)素(su)(su)進行了(le)優化,得到的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)佳酶(mei)解(jie)條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)為(wei)(wei)(wei)：酶(mei)解(jie)時(shi)間80min、酶(mei)解(jie)溫度(du)(du)(du)(du)42.5℃、酶(mei)解(jie)pH6.28、酶(mei)與(yu)(yu)底物比(bi)270U/g。此時(shi)酪(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)白(bai)糖(tang)(tang)巨肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)得率為(wei)(wei)(wei)17.91mg/g干酪(lao)(lao)(lao)(lao)素(su)(su)。 在酪(lao)(lao)(lao)(lao)蛋(dan)白(bai)糖(tang)(tang)巨肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)離(li)(li)純化部(bu)分(fen)(fen),考察了(le)不(bu)(bu)同(tong)絮凝(ning)(ning)劑在CGMP初(chu)提(ti)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)效果(guo)(guo)、絮凝(ning)(ning)法與(yu)(yu)等(deng)電(dian)點沉(chen)淀(dian)法的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)優劣、超(chao)濾(lv)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)佳條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)、離(li)(li)子(zi)交(jiao)換樹脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)佳條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)等(deng)。結(jie)果(guo)(guo)表(biao)明(ming)殼聚糖(tang)(tang)、硫酸(suan)鋁鉀、硫酸(suan)鋁等(deng)三種絮凝(ning)(ning)劑的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)絮凝(ning)(ning)效果(guo)(guo)較好(hao),但不(bu)(bu)如等(deng)電(dian)點沉(chen)淀(dian)法；超(chao)濾(lv)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)單因(yin)素(su)(su)實驗(yan)表(biao)明(ming),超(chao)濾(lv)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)佳條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)是(shi)：壓力0.276Mpa、轉速400r/min、樣(yang)品(pin)(pin)pH7.5。篩選的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)陰離(li)(li)子(zi)交(jiao)換樹脂(zhi)D280對CGMP的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)離(li)(li)效果(guo)(guo)較好(hao),適(shi)合(he)工(gong)業化生產。通過(guo)離(li)(li)子(zi)交(jiao)換樹脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)吸附及(ji)(ji)(ji)洗(xi)(xi)脫條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)研究(jiu),確立其最(zui)適(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)離(li)(li)條(tiao)件(jian)(jian)(jian)(jian)為(wei)(wei)(wei)：進樣(yang)體(ti)積(ji)(ji)1/10BV(柱床體(ti)積(ji)(ji)),樣(yang)品(pin)(pin)pH7.5,采(cai)用(yong)0.1mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)NaCl溶(rong)(rong)液(ye)梯(ti)度(du)(du)(du)(du)洗(xi)(xi)脫,洗(xi)(xi)脫速度(du)(du)(du)(du)1BV/h,各梯(ti)度(du)(du)(du)(du)洗(xi)(xi)脫體(ti)積(ji)(ji)2BV,CGMP被洗(xi)(xi)脫的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)NaCl溶(rong)(rong)液(ye)濃度(du)(du)(du)(du)為(wei)(wei)(wei)0.5mol/L。SDS-PAGE檢測結(jie)果(guo)(guo)表(biao)明(ming),洗(xi)(xi)脫液(ye)中CGMP的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)條(tiao)帶單一(yi),洗(xi)(xi)脫效果(guo)(guo)較好(hao)。 經過(guo)噴(pen)霧(wu)干燥(zao)法制(zhi)得3種不(bu)(bu)同(tong)純度(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)CGMP樣(yang)品(pin)(pin),根據國家標(biao)準,測定樣(yang)品(pin)(pin)相(xiang)關(guan)(guan)理化指(zhi)標(biao)。結(jie)果(guo)(guo)表(biao)明(ming)CGMP樣(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糖(tang)(tang)基(ji)化度(du)(du)(du)(du)和(he)純度(du)(du)(du)(du)較高(gao),符合(he)產品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)衛生指(zhi)標(biao)。

作者：佚名　　來源：知網空間 

上篇：

下篇：